無需基因突變，治療先天性肌營養(yǎng)不良1A型

先天性肌營養(yǎng)不良1A型（MDC1A），是肌營養(yǎng)不良癥的一種，屬于遺傳性消耗疾病，因編碼層黏連蛋白α2的 LAMA2 基因發(fā)生突變導致，之前的研究表明，增加編碼層黏連蛋白α1（LAMA1）的表達，可以幫助緩解該疾病小鼠模型的癥狀，但由于LAMA1基因較大，遞送LAMA1基因的常規(guī)基因治療方法難以實現(xiàn)。

2019年7月24日，加拿大多倫多兒童病醫(yī)院 Ronald D. Cohn 團隊在 Nature 雜志發(fā)表了題為：A mutation-independent approach for muscular dystrophy via upregulation of a modifier gene 的最新論文。

研究人員使用CRISPR-dCas9技術，通過AAV9型病毒載體遞送，激活LAMA1基因，從而上調(diào)了Lama1蛋白的表達，MDC1A疾病模型小鼠在接受這種治療后，能夠預防肌肉消耗和麻痹癥狀，而且該方法能夠幫助已經(jīng)出現(xiàn)肌營養(yǎng)不良癥狀的小鼠恢復部分肌肉功能。

總的來說，這些數(shù)據(jù)證明了CRISPR-dCas9介導的上調(diào) Lama1 蛋白的方法是可行的，而且有明顯的治療益處，這表明無需引入基因突變，即可對先天性肌營養(yǎng)不良1A型（MDC1A）患者進行治療。而且該方法對多種疾病調(diào)節(jié)基因具有廣泛的適用性，并且可以作為許多先天性遺傳疾病和后天性疾病的治療策略。

對CRISPR/Cas9治療杜氏肌營養(yǎng)不良的長期觀察

2019年2月份，美國杜克大學的研究人員在國際頂級醫(yī)學期刊 Nature Medicine 雜志發(fā)表了題為：Long-term evaluation of AAV-CRISPR genome editing for Duchenne muscular dystrophy 的研究論文。

該研究使用CRISPR/Cas9基因編輯技術，直接刪除導致杜氏肌營養(yǎng)不良癥的基因突變位點附近的堿基，產(chǎn)生縮短版的抗肌萎縮蛋白，成功恢復部分肌肉能力。實驗還表明，一次注射，效果可持續(xù)一年以上。

杜氏肌營養(yǎng)不良癥（DMD）是一種發(fā)病率相對較高的單基因疾病，由X染色體上編碼抗肌萎縮蛋白基因（dystrophin）突變所致，是治療性基因組編輯的熱門候選者。最近有幾個在DMD的臨床前模型中進行基因組編輯的研究報道，然而，這些基因組編輯方法的長期持久性和安全性尚未得到解決。

由于dystrophin基因巨大，有多達79個外顯子，因此直接遞送正確編碼的dystrophin基因的治療方式行不通。該研究另辟蹊徑，使用CRISPR/Cas9基因編輯技術，直接刪除突變位點附近的堿基，產(chǎn)生縮短版的抗肌萎縮蛋白，依然可以恢復部分肌肉能力。

本項研究顯示，通過靜脈單次注射AAV8裝載的CRISPR后，基因組編輯效果在肌營養(yǎng)不良癥的小鼠模型中可持續(xù)長達1年的時間。此外，在此期間抗肌萎縮蛋白表達的恢復得以維持。

這項研究還表明AAV-CRISPR在給予成年小鼠治療時具有免疫原性，然而，通過治療新生小鼠可以避免體液和細胞免疫反應。盡管存在對Cas9的宿主反應和持續(xù)的非預期的基因組修飾，但AAV-CRISPR具有良好的耐受性，長達1年時間，且沒有毒性跡象。

該研究進一步確定了永久性基因校正作為DMD和潛在其他疾病的治療方法的可行性。未來的研究應側重于通過優(yōu)化遞送和基因編輯策略來提高整體編輯效率和增加預期基因修飾的比例（減少脫靶效應）。